1     壓液相色譜法

1.1   范圍

    本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用壓液相色譜法測(cè)定飲用水及其水源水中草甘膦和氨甲基膦酸。

本法適用于生活飲用水及其水源水中草甘膦和氨甲基膦酸的測(cè)定。

本法草甘膦和氨甲基膦酸的zui低檢測(cè)質(zhì)量均為5.0ng。若取200uL直接進(jìn)樣則zui低檢測(cè)質(zhì)量濃度均為25μg/L。

目前未見(jiàn)有基質(zhì)干擾的報(bào)道。草甘膦可在氯消毒過(guò)的水中降解。草甘膦在礦物和玻璃表面有吸附作用。

1.2    原理

采用陰離子或陽(yáng)離子交換色譜法分離草甘膦和氨甲基膦酸，經(jīng)過(guò)柱后衍生，用熒光檢測(cè)器檢測(cè)。柱后衍生反應(yīng)為用此氯酸鹽溶液將草甘膦氧化成氨基乙酸；然后氨基乙酸與鄰苯二醛（OPA）和2-巰基乙醇（MERC）的混合液反應(yīng)，形成一種光的異吲哚產(chǎn)物。氨甲基膦酸可直接與OPA/MERC混合液反應(yīng)，在次氯酸鹽存在下，檢測(cè)靈敏度會(huì)下降。

1.3    材料與試劑

1.3.1  水：用純水系統(tǒng)生產(chǎn)的水或HPLC水。

1.3.2  磷酸（ρ20 =1.69g/mL）：R304

1.3.6  磷酸二氫鉀：R311

1.3.7  乙二胺四乙酸二鈉溶液：將0.37g的乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA• 2H2O）加入1L純水中配置溶度為0.001mol/L的溶液，并經(jīng)0.22μm或0.45μm的濾膜過(guò)濾。

1.3.8  氯化鈉：R313

1.3.10  次氯酸鈣：R303

1.3.11  氧化試劑：見(jiàn)試劑盒（P/N：R300-01）操作手冊(cè)

1.3.12  鄰苯二醛（OPA）：R301

1.3.13  2-巰基乙醇（MERC）：R302

1.3.14  硼砂：R312

1.3.16  熒光標(biāo)記溶液：見(jiàn)試劑盒（P/N：R300-01）操作手冊(cè)

1.3.17  草甘膦：純度≥99%。

1.3.18  甲基膦酸：純度≥99%。

1.4    儀器設(shè)備

1.4.1  壓液相色譜儀：附熒光檢測(cè)器。

1.4.2  色譜柱：A72545， Comatex SAX， 250X4.6mm,5um

1.4.3  柱后反應(yīng)器：CoM6000PCR雙衍生系統(tǒng)

1.5    樣品

1.5.1  樣品的性質(zhì)

1.5.1.1  樣品的名稱：水樣。

1.5.1.2  樣品采集后應(yīng)用聚丙烯容器儲(chǔ)存，加入100mg/L的硫代硫酸鈉可消除氯帶來(lái)的影響。樣品應(yīng)儲(chǔ)存在4℃、避光的環(huán)境中，并在2周內(nèi)測(cè)定。

1.5.2  樣品預(yù)處理

1.5.2.1樣品濃度≥25μg/L時(shí)，不需濃縮，取9.9mL的樣品和0.1mL 0.1mol/L的EDTA，經(jīng)0.22μm或0.45μm的濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣200μL。

1.5.2.2  樣品濃度低于檢出*需要對(duì)樣品進(jìn)行濃縮，取500mL水樣，若為懸浮液，將樣品通過(guò)粗濾膜過(guò)濾，取250mL移至500mL圓底瓶中，加5mL鹽酸（18.1.3.4）于燒瓶中，5mL鹽酸（18.1.3.4）于剩余樣品中。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮，緩慢升溫從20℃到60℃。在*部分*蒸發(fā)前，加入剩余樣品和2次5mL清洗液，蒸干，若必要，用干氮去除zui后的痕量水。取2.9mL流動(dòng)相（若必要調(diào)節(jié)PH=2）和0.1mL0.03mol/L的EDTA溶解殘留。過(guò)0.45μm濾膜，進(jìn)樣。

1.6    分析步驟

1.6.1  儀器的調(diào)整

1.6.1.1  流動(dòng)相: 見(jiàn)試劑盒（P/N：R300-01）操作手冊(cè)

1.6.1.2  柱溫：50℃。

1.6.1.3  流速：1.0mL/min。

1.6.1.4  熒光檢測(cè)器：激光波長(zhǎng)Ex=230nm（氘）、340nm（石英鹵素或氙），發(fā)射波長(zhǎng)Em=420nm~455nm。

1.6.1.5  柱后反應(yīng)條件

1.6.1.5.1  氧化劑流速：0.5mL/min。

1.6.1.5.2  OPA-MERC溶液：流速0.5mL/min。

1.6.2  校準(zhǔn)

1.6.2.1  定量分析中的標(biāo)準(zhǔn)方法：外標(biāo)法。

1.6.2.2  標(biāo)準(zhǔn)樣品

1.6.2.2.1  草甘膦和氨甲基磷酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：用水配置草甘膦、氨甲基膦酸均為0.1mg/mL儲(chǔ)備溶液。稀釋儲(chǔ)備液配置溶度為10μg/mL、1.0μg/mL系列工作液。儲(chǔ)存于聚丙烯瓶中，冰箱保存。每月重配置。

1.6.2.2.2  草甘膦和氨甲基磷酸HPLC校準(zhǔn)溶液：用0.001mol/L EDTA二鈉溶液配置草甘膦、氨甲基磷酸溶度為0.11mg/mL 儲(chǔ)備液。稀釋儲(chǔ)備液配置0、0.025、0.05、0.10、0.50、1.00μg/mL標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。儲(chǔ)存于聚丙烯瓶中，冰箱保存。每月重配置。

1.6.2.2.3  標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)的表示：用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測(cè)定結(jié)果。

1.7  定量分析 

取200μL水樣注入色譜儀，測(cè)量峰或峰面積。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸分析計(jì)算草甘膦和氨甲基磷酸的濃度。濃縮樣品可通過(guò)濃縮因子（500mL原始樣品/3mL），確定原始水樣濃度。

1.8  度和度

對(duì)樣品（加標(biāo)濃度0.5μg/L~5000μg/L）重復(fù)測(cè)定六次，草甘膦的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為12%~20%，平均標(biāo)準(zhǔn)偏差為15%。氨甲基膦酸的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.6%~29%，平均標(biāo)準(zhǔn)偏差為14.5%.草甘膦的加標(biāo)回收率為94.6%~120%，平均回收率104%。氨甲基膦酸的回收率為86.0%~100%，平均回收率為93.1%。